PRODUCT CLASSIFICATION
產(chǎn)品分類TECHNICAL ARTICLES
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蛋白A瓊脂糖凝膠英文名稱:Protein A Berpharose FF貨號(hào):B2832規(guī)格:1ml本產(chǎn)品僅供科研實(shí)驗(yàn)用,不做其它用途!
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蛋白A瓊脂糖凝膠
英文名稱:Protein A Berpharose FF
貨號(hào):B2832
規(guī)格:1ml
1.產(chǎn)品介紹
重組蛋白A瓊脂糖凝膠FF(Protein A Berpharose FF)親和介質(zhì)以自制的瓊脂糖凝膠為基質(zhì),以重組蛋白A(rProtein A)為配基,具有很高的物理化學(xué)穩(wěn)定性,配基不易脫落,壽命長(zhǎng),使用方便,應(yīng)用廣泛。蛋白A(Protein A)能特異性地與抗體IgG分子的Fc區(qū)結(jié)合,所以Protein A親和介質(zhì)可用于抗體(單抗和多抗)的分離純化,經(jīng)過一步親和層析,即可從腹水、血清和培養(yǎng)液等樣品中得到高純度的抗體。
2.規(guī)格
1ml(預(yù)裝柱)、5ml(預(yù)裝柱)、10ml(預(yù)裝柱)、25ml、100ml、500ml、1L 純化流程
應(yīng)用舉例:
結(jié)合緩沖液:20 mM磷酸緩沖液,150 mM NaCl,pH 7.0
洗脫緩沖液:0.1M甘-氨酸,PH3.0或0.1M檸檬酸緩沖液,pH 4.0
中和緩沖液:1 M Tris-HCl,pH 8.5
1) 1 ml重組蛋白A瓊脂糖凝膠預(yù)填柱用5-10個(gè)柱床體積的蒸餾水洗去保存液。
2)用結(jié)合緩沖液結(jié)合緩沖液平衡5-10個(gè)柱床體積。
3)將5 ml人多抗血清用結(jié)合緩沖液稀釋到50ml,0.45μm濾膜過濾上樣。
4)用結(jié)合緩沖液再洗5-10個(gè)柱床體積。
5)用洗脫緩沖液洗脫抗體,收集洗脫峰,并用中和緩沖液調(diào)節(jié)其pH至中性。
6)每次使用后依次使用3個(gè)柱體積的結(jié)合緩沖液,5個(gè)柱體積的去離子水,5個(gè)柱體積的20%的乙醇平衡保存,防止填料被細(xì)菌污染。
7) SDS-PAGE電泳分析。
6.注意事項(xiàng):
1)樣品洗脫后一般pH很低,應(yīng)立刻用堿性中和緩沖液(如1MTris-HCl,pH8.5)將收集到的抗體溶液中和到中性,或在收集容器中事先裝5-10%、pH7.5的緩沖液(如1MTris-HCl或1M磷酸緩沖液),以利于維持抗體的生物活性,避免抗體失活。
2)使用時(shí)保證柱子和緩沖液的溫度一致,避免柱床內(nèi)產(chǎn)生氣泡,影響純化效果。
3)填料再生清洗:隨著一些變性物質(zhì)的沉淀和蛋白的聚集,往往造成流速和結(jié)合載量下降,嚴(yán)重影響純化效果,這時(shí)需要對(duì)填料進(jìn)行再生清洗(如下步驟)
去除沉淀或變性物質(zhì):用2倍柱體積的6M鹽酸胍溶液進(jìn)行清洗,然后立即用5倍柱體積的PBS, pH 7.4清洗。
去除疏水性吸附造成的非特異性吸附物質(zhì):用3-4倍柱體積的70%乙醇或2倍柱體積的1% Triton™X-100清洗,然后然后立即用5倍柱體積的PBS, pH 7.4清洗
4)本產(chǎn)品保存條件:20%乙醇,4~8℃。
郵箱:1170233632@qq.com
傳真:021-51870610
地址:上海市顧戴路2988號(hào)B幢7樓