大鼠血管內(nèi)皮鈣黏蛋白（VE-cadherin）ELISA操作注意事項

使用說明書

檢測原理

試劑盒采用雙抗體夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）。往預(yù)先包被大鼠血管內(nèi)皮鈣黏蛋白（VE-cadherin）捕獲抗體的包被微孔中，依次加入標(biāo)本、標(biāo)準(zhǔn)品、HRP標(biāo)記的檢測抗體，經(jīng)過溫育并洗滌。用底物TMB顯色，TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的大鼠血管內(nèi)皮鈣黏蛋白（VE-cadherin）呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm 波長下測定吸光度（OD 值），計算樣品濃度。

樣品收集、處理及保存方法

1.  血清：使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管，操作過程中避免任何細(xì)胞刺激，收集血液后，3000轉(zhuǎn)離心10分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心地分離。

2.  血漿：EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000轉(zhuǎn)離心30分鐘取上清。

3.  細(xì)胞上清液：3000轉(zhuǎn)離心10分鐘去除顆粒和聚合物。

4.  組織勻漿：將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000轉(zhuǎn)離心10分鐘取上清。

5.  保存：如果樣本收集后不及時檢測，請按一次用量分裝，凍存于-20℃，避免反復(fù)凍融，在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。

操作注意事項

1.  試劑盒保存在2-8℃，使用前室溫平衡60分鐘。從冰箱取出的濃縮洗滌液會有結(jié)晶，這屬于正?，F(xiàn)象，水浴加熱使結(jié)晶溶解后再使用。樣本在使用前也要在室溫平衡60分鐘。

2.  實驗中不用的板條應(yīng)立即放回自封袋中，密封（低溫干燥）保存。

3.  預(yù)處理后的樣本無需稀釋，直接取10μL加樣即可。

4.  嚴(yán)格按照說明書中標(biāo)明的時間、加液量及順序進(jìn)行溫育操作。

5.  所有液體組分使用前充分搖勻。

大鼠血管內(nèi)皮鈣黏蛋白（VE-cadherin）ELISA操作注意事項