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超微量 Ca +2Mg +2—ATP 酶測試盒的測定意義

更新時間:2023-12-08      瀏覽次數(shù):326

超微量 Ca +2Mg +2—ATP 酶測試盒的測定意義

(測紅細(xì)胞)

一、測定意義:

ATP 酶存在于組織細(xì)胞及細(xì)胞器的膜上,是生物膜

上的一種蛋白酶,它在物質(zhì)運(yùn)送、能量轉(zhuǎn)換以及信息傳

遞方面具有重要的作用,機(jī)體在缺氧及一些疾病狀態(tài)下,

此酶活力發(fā)生一系列改變。

二、測定原理:

ATP 酶可分解 ATP 生成 ADP 及無機(jī)磷,測定無機(jī)磷的

量可判斷 ATP 酶活力的高低。

三、試劑組成與配制:(試劑盒有效期 個月)

 

四、紅細(xì)胞的前處理:

1、紅細(xì)胞計數(shù)(見附錄)或血紅蛋白測定(試劑本所有售)。

2、紅細(xì)胞溶血液的制備:

a、壓積紅細(xì)胞溶血液的制備取肝素抗凝全血,1000

轉(zhuǎn)/分,離心 10 分鐘,棄上層血清,留下層壓積紅

細(xì)胞,取一定量的壓積紅細(xì)胞,加 49 倍的雙蒸水,

例如取 5μL 的壓積紅細(xì)胞加入 245μL 雙蒸水中,混

勻,使其充分溶血,對光觀察直至溶液透亮。如果

預(yù)試結(jié)果太高,再將溶血液稀釋成不同濃度再進(jìn)行

預(yù)試后,再決定取樣濃度。

b、全血紅細(xì)胞溶血液的制備:取小鼠全血,輕輕搖勻,

取一定量的全血按照 1

24 的體積比加 24 倍雙蒸水,

制成 25 倍稀釋的溶血液,例如取 5μL 的全血加雙蒸

 120μL 充分混勻,制成 25 倍稀釋的溶血液。對光

觀察直至溶液透亮。如果預(yù)試結(jié)果太高,再將溶血

液稀釋成不同濃度再進(jìn)行預(yù)試后,再決定取樣濃度。

[ 1]:制備好的溶血液盡快進(jìn)行檢測,否則易失活,

因而必須在所有的準(zhǔn)備工作做好以后再配制

溶血液。

[ 2]:用不完的抗凝全血 4℃可保存 2天, -20

以下保存一周或者更長時間。

[ 3]:不可用磷酸鹽緩沖液或含磷的試劑稀釋樣本。

[ 4]:預(yù)試結(jié)果將絕對吸光度值(測定管吸光度值

對照管吸光度值)控制在 0.2 左右為宜。

附錄Ⅰ:紅細(xì)胞計數(shù)法

紅細(xì)胞計數(shù)有以下三種方法,只需取其中一種即可以。

1、計數(shù)板直接紅細(xì)胞計數(shù):

①、紅細(xì)胞稀釋液的配制:檸檬酸三鈉 3.8 克,甲醛

1mL,雙蒸水 100mL,混勻,4℃保存。

②、 支試管,加入紅細(xì)胞稀釋液 2mL,取抗凝全

 10µl 加入試管稀釋液中,反復(fù)吹吸數(shù)次,

再將試管顛倒數(shù)次混勻。

③、取一滴稀釋血液灌入計數(shù)板。(應(yīng)一次灌滿,而且

不要灌得太多。)

④、用高倍鏡計數(shù)左上、左下、右上、右下,中央 5

個中方格的紅細(xì)胞數(shù),將數(shù)得的數(shù)字×10 10,

即為每升血中的紅細(xì)胞數(shù)。

2、光電比濁法計紅細(xì)胞數(shù):

取試管 支,加入上述紅細(xì)胞稀釋液 4mL,再

 20µl 抗凝全血,加入 4mL 稀釋液中,反復(fù)吹吸數(shù)

次,再將試管顛倒數(shù)次混勻,立即倒入比色杯中,

 540nm,1cm 光徑,雙蒸水調(diào)零進(jìn)行比色,記下

吸光度值。以計數(shù)板計數(shù)的紅細(xì)胞的數(shù)值為橫坐標(biāo),

以相應(yīng)管的吸光度值為縱坐標(biāo),作標(biāo)準(zhǔn)曲線。您可

以不做曲線,用附錄Ⅱ參考標(biāo)準(zhǔn)曲線圖二(鼠紅細(xì)

胞數(shù)與比濁法吸光度換算曲線)。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線查出

紅細(xì)胞數(shù)。

3、用血紅蛋白(Hb)來換算紅細(xì)胞數(shù):

 10µl 抗凝全血加入 2.5mL 血紅蛋白測試液

(本所有供應(yīng))中,混勻,靜置 10 分鐘,于 540nm,

1cm 光徑,雙蒸水調(diào)零進(jìn)行比色。將測得的吸光度

乘以 367.7 即為血紅蛋白的值。以計數(shù)板計數(shù)的紅細(xì)

胞的數(shù)值為橫坐標(biāo),以相應(yīng)管的血紅蛋白數(shù)為縱坐

標(biāo),作標(biāo)準(zhǔn)曲線。您可以不做曲線,用附錄Ⅱ的參

考標(biāo)準(zhǔn)曲線圖一(鼠紅細(xì)胞數(shù)與血紅蛋白數(shù)的換算

曲線)。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線查出紅細(xì)胞數(shù)。

超微量 Ca +2Mg +2—ATP 酶測試盒的測定意義


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