隨著電子檢驗儀器的研制和普遍使用，推動了科研診斷試劑研究和使用廣泛化的進程，商品試劑與標準液按檢測項目組合成一套放在一個包裝盒內(nèi)叫試劑盒（reagent kit），或叫試劑組合（reagent set）。

   與自動化分析儀或者酶標儀匹配的試劑盒的研制、生物試劑和供應走向產(chǎn)業(yè)化的道路，它無疑是科研檢驗發(fā)展*一個巨大的技術進步。但是，試劑盒的質(zhì)量，將嚴重影響測定結(jié)果的正確性。為了增強識別試劑質(zhì)量的能力，提高拒用劣質(zhì)試劑的自覺性，掌握有關試劑盒的質(zhì)量標準和質(zhì)量評價是十分有益的。

   我們先來說說和自動生化分析儀想匹配的生化分析試劑盒的相關情況。此類試劑種類繁多，有液體型、粉劑型、片劑型，有單一試劑、雙試劑、干試劑、多試劑等。

一、液體型試劑和粉（片）劑型試劑

（一）液體型試劑

無論是單試劑還是雙試劑型試劑，目前乃至今后仍以液體型為主要劑型。其優(yōu)點是液體型試劑

的試劑組分高度均一，瓶間差異小，測定重復性好和使用方便；它也無需加入任何輔助試劑及蒸餾

水，避免了外源性水質(zhì)對試劑的影響，性能較穩(wěn)定，測定結(jié)果較為準確。缺點是液體型試劑（尤其

是酶試劑）保存時間較短，不便于運輸。

1．液體單試劑        

所謂液體單試劑就是將某種生化檢驗項目所用到的試劑科學地混合在一起，

組成為一種試劑。應用時，只須將標本和試劑按一定比例混合，即可進行相應的生化反應，然后用

適當?shù)姆椒z測結(jié)果。應用十分方便。為了簡化測定操作程序，提高工作效率，一度大多數(shù)試劑廠

家都生物試劑單試劑，以滿足用戶的需要。如測定葡萄糖和膽固醇的酶法試劑等。這些試劑的廣泛使用，

充分顯示出酶法試劑無毒性、操作簡便快速、測定結(jié)果可靠等優(yōu)點。但對有些生化檢驗項目來說，

單試劑存在抗干擾能力差的缺點，給測定結(jié)果帶來相當大的分析誤差。例如，甘油三酯測定的一步

法試劑，由于未消除樣品中的游離甘油，使測定結(jié)果中包括了內(nèi)源性甘油（平均約為 0.11mmol/L），會給甘油三酯的測定值帶來較大的誤差。類似的情況還見于維生素C和尿酸及膽紅素對Trinder+選用時值得注意。

2．液體雙試劑       所謂液體雙試劑就是將某些生化檢測項目所用到的試劑，按用途科學地分成兩類，分別配成兩種試劑，通常試劑加入后可起到全部或部分消除某些內(nèi)源性干擾的作用，第二試劑為啟動被檢測物質(zhì)反應的試劑，兩種試劑混合后才共同完成被檢項目的生化反應。然后用適當?shù)姆椒z測結(jié)果。雙試劑型試劑盒，它保持了單試劑的優(yōu)點，增強了抗干擾能力和試劑的穩(wěn)定性，提高了測定的準確性，代表了診斷試劑盒劑型研制的主要發(fā)展方向。

（二）粉（片）劑型試劑

所謂粉劑型及片劑型試劑，即是將試劑的各組分用球磨技術粉碎成粉劑或混合后壓成片劑，使

用前再加入的溶液復溶成液體試劑。干粉試劑如果在凍干分裝前是液體型的，則其各組分是相

當均勻的；但如果用固體原料研磨后制成粉劑或片劑，則存在許多問題：①要使試劑各組分混合得

非常均勻，技術難度很大；②分裝過程中的稱量誤差及復溶時加水量的準確性影響試劑的瓶間差；

③水質(zhì)優(yōu)劣對試劑的穩(wěn)定性和測定的可靠性有相當大的影響。

二、其它類型試劑

為了適應生化分析儀和測定方法學的進步，近年來研究了許多新型的試劑盒，主要有以下幾種。

（一）快速反應試劑盒

快速反應試劑盒主要是為了適應生化分析的技術進步，縮短反應時間，提高工作效率。如血液

葡萄糖快速測定試劑盒。其試劑成分及濃度為磷酸鹽緩沖液  100mmol/  L，pH7.4±0.1，葡萄糖氧

化酶  > 40u / ml，變旋酶  > 0.2u / ml，過氧化物酶  > 2.5u / ml，4-氨基安替比林 0.5 mmol/ L，

4-羥基苯甲酸 4  mmol/L，亞鐵qing化鉀 1mg  /  L，疊氮鈉 0.4g  /  L。同一般葡萄糖氧化酶法試劑相

比是明顯增加了葡萄糖氧化酶及過氧化物酶用量，更主要是增加了變旋酶，可使反應加快，3～4

分鐘后即生成終顏色。再如快速膽固醇試劑盒，用的是 pH6.6±0.2，250mmol/ L 磷酸鹽緩沖液，

膽固醇酯酶為 250u / L，膽固醇氧化酶 250 u/L，過氧化物酶 4000u / L，4-氨基安替比林 0.3mg /

L，DHBS      8mmol/  L。樣品與試劑比例是 1:100。37℃反應 2 分鐘即可完成反應?？梢悦黠@看出是

加大膽固醇酯酶和膽固醇氧化酶等效應酶用量，從而使反應加速。目前要求這種快速反應的試劑用

戶還不多，但它是一種發(fā)展趨勢。

（二）一步法試劑盒

這是隨著方法學的改進，特別是免疫技術的進步，利用特異性抗體參與反應的新型試劑。如高

密度脂蛋白（HDL）測定。以往多采用超速離心法和沉淀法使 HDL 從其他脂蛋白中分離后再測定 HDL中膽固醇，沉淀法操作繁瑣，必須預先處理才能用生化分析儀分析。近年來采用抗低密度脂蛋白和極低密度脂蛋白血清預先抑制 LDL 及 VLDL，然后再測定 HDL，這樣就減少沉淀預處理，直接測定出高密度膽固醇。類似的試劑盒還有肌酸激酶（CK）及其同工酶 CK-MB 的測定。

（三）多項同測組合試劑盒

這類型試劑主要是用于三點雙項同測終點法、三點雙項同測連續(xù)監(jiān)測法和三點雙項同測終點速

率法測定的試劑盒。很明顯這類試劑同以往單試劑和雙試劑有明顯不同。隨著雙試劑的應用，研究

生化分析儀的分析方法也相應發(fā)展，其中有一種分析方法是在同一比色杯中，先后加入兩種試劑與

檢品中的兩種被檢物發(fā)生反應，在各反應達到平衡期時分別測定，整個測定過程進行三次比色，測

定兩個項目，稱為三點雙項同測終點法。例如甘油三脂、膽固醇同時測定法。該法的試劑為

Tris 緩沖液，含膽固醇酯酶、ATP、MgCl2、過氧化物酶、磷酸甘油氧化酶、甘油激酶、脂肪酶、4-

氨基安替吡啉、2-羥 3.5-氯苯磺酸鈉、Triton-X 等，第二試劑為 Tris 緩沖液，其中含膽固醇氧化酶。當血清或標準液（包括甘油三酯和膽固醇）與試劑混合后立即進行次比色（510nm）

得空白吸光度。37℃作用 5 分鐘后進行第二次比色，為甘油三酯與酶試劑反應終點的吸光度，又是

膽固醇測定的空白吸光度。然后加入第二試劑，37℃作用 5～10 分鐘，進行第三次比色，為膽固醇

與酶試劑反應終點的吸光度。

甘油三酯濃度=[A2（樣品）-AB（樣品）]/[A2（TG  標準）-AB（TG  標準）]×甘油三酯標準的濃度

總膽固醇濃度=[A3（樣品）-A2（樣品）]/[A3（TC  標準）-A2（TC  標準）]×膽固醇標準的濃度

（四）卡式試劑盒

試劑首先裝入試劑瓶，瓶上充分使用編碼技術，而后根據(jù)編碼啟動調(diào)配、使用及更換儲存。其

特點是：①卡式試劑瓶上條碼令使用者可快捷準確地輸入試劑數(shù)據(jù)，如測試數(shù)量、批號、有效期，

保證正確識別試劑。②試劑裝載后能自動調(diào)配，可消除潛在誤差，并節(jié)省操作時間。③持續(xù)不斷地

監(jiān)察儀器上已裝載的試劑存量，并在供應量不足時通知使用者。試劑裝載使用時間可長達一個月。

④所有卡式試劑盒大小劃一，有利儲存。卡式試劑設計較*，可防止試劑蒸發(fā)及降解，能確保試

劑裝載后的穩(wěn)定性更長，從而節(jié)省成本。⑤標簽根據(jù)測試類別以顏色編碼，便于使用者識別。

（五）濃縮試劑盒

上述卡式試劑盒就是采用的濃縮試劑，使用時自動完成稀釋，而后用于測定。濃縮試劑便于工

作、儲存、運輸、裝載等*性是很明顯的，濃縮試劑便于監(jiān)控、減少校正次數(shù)、提高工作質(zhì)量。

在濃縮試劑基礎上又組成雙試劑及多項同測組合試劑，又體現(xiàn)出它們所具有的特點及*性。

三、液體雙試劑盒的特點

液體雙試劑與其它類型試劑比較具有液體試劑和雙試劑的優(yōu)點。

（一）提高了抗干擾反應的能力

在研究生化測定過程中，血標本除了含有待測物質(zhì)外，還含有各種酶、有機物、無機鹽等物質(zhì)，

這些物質(zhì)都會干擾或參與測試反應，引起非特異性反應干擾，而雙試劑型試劑盒設計的一個主要目

的就是為了克服這種干擾反應。在測定過程中，首先讓試劑Ⅰ與標本中的干擾物質(zhì)反應，反應  5

分鐘后，再用試劑Ⅱ啟動真正的測試反應，從而使測定結(jié)果更加準確。

例如：尿素氮的酶法測定。此測定通過二步化學反應來完成。

在 340nm 下監(jiān)測吸光度值的變化，與同樣處理的尿素標準液比較，計算出樣品尿素含量。這

一反應的步特異性高，脲酶只對樣品中的尿素起催化作用，但第二步反應就存在一些干擾：樣

品中（如血清、尿液）含有 NH4，（內(nèi)源性 NH4）會消耗 NADH，使測定結(jié)果偏高；復溶試劑時所

用蒸餾水如果含有 NH4 或者所用器材不夠清潔被 NH4 污染（外源性 NH4）也會消耗 NADH，使測

定結(jié)果偏高；當樣品中（如血清）含有較高的丙酮酸時，血清中的乳酸脫氫酶會催化下列反應：

LDH

單一試劑型試劑測定尿素時存在內(nèi)源性 NH4、外源性 NH4 和內(nèi)源性丙酮酸的干擾，使測定結(jié)果產(chǎn)

生正誤差。

測定尿素的酶法雙試劑（液體型）試劑盒有兩個試劑，均為液體，不必復溶。試劑含α—

酮戊二酸、NADH、谷氨酸脫氫酶及維持 pH 的緩沖物質(zhì)。第二試劑含脲酶、NADH、α—酮戊二

酸。當被檢樣品加入試劑在 37℃作用 5 分鐘，將內(nèi)源 NH4、外源性 NH4 及內(nèi)源性丙酮酸消耗 。 接 著 加 入 第 二 試 劑 使 樣 品 中 的 尿 素 被 脲 酶 水 解 成   NH4 ， 再 進 行 第 二 步 反 應 ，

GLDH

了尿素測定的準確性。

再如：目前在研究化學檢測中用的較為普遍的指示反應 Trinder 反應（主要用于代謝產(chǎn)物的測

定，如葡萄糖、尿酸、甘油三脂、膽固醇、HDL），此指示反應的特異性較差，受到血標本中的膽

紅素、抗壞血酸的干擾，導致結(jié)果的陰性偏差。其中為了克服膽紅素的干擾，國內(nèi)外部分試劑已通

過加入鐵qing化鉀、調(diào)整顯色劑改變測定波長來排除膽紅素的干擾，而抗壞血酸的影響和干擾一直較

難克服，從面影響了測定結(jié)果。液體雙試劑（包括甘油三脂、膽固醇、HDL、尿酸、肌酐）在試

劑 I 中加入了抗壞血酸氧化酶，當標本和試劑 I 先反應，便可克服標本抗壞血酸的干擾，當抗干擾

反應完畢后，再加入試劑Ⅱ啟動反應，從而使得整個反應的特異性大大提高，準確度也相應提高。

另外，常見的干擾是黃疸。有的測定試劑中加有膽紅素氧化酶，先作用黃疸血清使其氧化無

色，而后再加反應試劑完成反應測定，消除黃疸的影響。

（二）使測定更科學合理

由于液體雙試劑的使用，使測定更加科學合理。如

LP

GK

GPO

POD

目前國內(nèi)研究生化檢驗使用的生化試劑絕大多數(shù)都是單一試劑，在甘油三脂測定中測得甘油三

脂的含量實際上是標本中甘油三脂與游離甘油的總含量，盡管研究上可以通過減去標本中平均游離

甘油的含量和修改正常范圍加以彌補，但是，由于研究標本的個體差異，使得血標本中游離甘油的

含量不可能都一樣。而液體雙試劑可先讓標本與試劑 I 反應（試劑 I 中包括甘油激酶、抗壞血酸氧

化酶、甘油—3—磷酸氧化酶、過氧化物酶），從而*消耗標本中游離甘油，排除抗壞血酸的干擾，

然后再用試劑Ⅱ含有 LP 和發(fā)色團啟動反應，使得測得的結(jié)果真正反映標本中甘油三脂的含量。

（三）穩(wěn)定性能優(yōu)良

目前研究化學檢定的許多項目都已用酶法進行測定，這些酶法測定與以往化學測定法相比具有

*的*性：①特異性高；②試劑單一，操作步驟簡單，可自動操作；③反應溫和，無污染

等。但是酶法生化商品試劑生物試劑的大技術障礙便是試劑的穩(wěn)定性問題，為此許多試劑生物試劑廠家推

出了凍干、干粉、片劑的酶法試劑，從而解決了成品貯存與運輸問題，然而在使用過程中仍然受到

了復溶后穩(wěn)定性的影響，各實驗室在使用中如果包裝太大，復溶后穩(wěn)定期過后便會造成浪費，如果

包裝太小，本身價格太高，造成日?；灣杀揪痈卟幌?。全液體酶法試劑從分配上解決了這一矛盾：

①用戶可根據(jù)每次標本量多少按一定比例配制適量工作液，當天配制當天用完，這樣便可減少試劑

損失。②如果用戶使用的自動生化分析儀有雙試劑測定功能，那么，就不必把雙試劑混合成工作試

劑進行測定，試劑的有效期一年便是工作液的有效期。

對于干粉、片劑型等需復溶的生化試劑，水質(zhì)的好與壞直接影響了復溶后工作液的穩(wěn)定性和測

定重復性。目前除了一些大城市的三級醫(yī)院有自制的試劑級的蒸餾水外，別的醫(yī)院很難獲得符合試

劑級要求的水，這就對干粉、片劑試劑的實際使用造成了一定影響。目前研究化學檢測中許多項目

已經(jīng)開始用酶法進行分析測定，而試劑中許多酶在水溶液中是比較“脆弱”的，許多雜質(zhì)都會影響

酶活力，如①水中  F  會引起某些酶失活；②水中的重金屬離子會影響酶活力；③水中某些微生物

會引起酶失活，除了水中某些“雜質(zhì)”會引起試劑中酶失活、部分失活而導致穩(wěn)定性、重復性下降

外，有些“雜質(zhì)”會直接影響測定結(jié)查，如水中含有 NH4 便會直接影響尿素氮測定的準確度。全

液體型生化試劑，在使用過程無需任何輔助試劑及蒸餾水，這就保證避免了外源水質(zhì)而引起的對試

劑的影響，保證了試劑在有效期內(nèi)的穩(wěn)定和測定結(jié)果的可靠。

（四）試劑組分高度均一

試劑中每一組分均一性是影響試劑測定重復性的一個重要因素。在干粉、片劑與凍干生化試劑

生物試劑過程要使每一試劑中十幾種組分（有的組分含量相當微量）分布相對均勻也是一個技術難度較

高的課題。在每一種試劑生物試劑過程中必須解決：①原料干粉生物試劑過程中每一組分的均勻性（凍干生

化試劑在凍干分裝前由于是液體的，每個組分是相當均勻）。②在分裝過程中由于加樣誤差引起的

均勻性問題（這一問題在凍干分裝過程中同樣存在：在片劑生物試劑過程中體現(xiàn)為每一片劑重量誤差）。

③在使用過程中，由于需加入復溶水，復溶水的加樣誤差也會造成瓶與瓶之間同一組分濃度不盡一

樣。上述三個原因或其中一個原因都會造成實際測定過程中的瓶間誤差，從而引起測定重復性下降。

液體型的生化試劑從生物試劑到使用全是液態(tài)，這就保證了每一個組分相對均勻，哪怕是十分微量的組

分，這就避免了實際操作中的誤差，能提高試劑測定的重復性。