小鼠骨橋素(OPN)elisa試劑盒基本信息

1979年Senger等報(bào)道一種與惡性轉(zhuǎn)化有關(guān)的一種包含RGD(精-甘-門冬氨酸)整合素結(jié)合區(qū)的磷酸化糖蛋白與腫瘤的關(guān)系,稱之為轉(zhuǎn)化相關(guān)性磷酸蛋白。后來(lái)Franzen等從骨組織中分離出一種磷酸蛋白,其特性與Senger等發(fā)現(xiàn)的磷酸蛋白相似,因其是細(xì)胞在骨基質(zhì)中的產(chǎn)物，并能在細(xì)胞與基質(zhì)中的礦質(zhì)形成一種橋連，人們將其命名為OPN。OPNzui早發(fā)現(xiàn)于骨基質(zhì)和牙齒中，后來(lái)一些學(xué)者在腎、內(nèi)耳、蛻膜、胎盤、平滑肌、被激活的T細(xì)胞、巨噬細(xì)胞等不同的組織細(xì)胞中也發(fā)現(xiàn)了OPN，因此OPN也曾被稱為44kD骨酸蛋白、PP69、骨延蛋白1、尿蛋白，早期T淋巴細(xì)胞活性1(Eta-1)、分泌的磷蛋白1SPP-1)、骨唾液酸蛋白1(BSP-1)、44 kD骨磷蛋白和2αR。自1986年以來(lái),相繼克隆了大鼠OPN、人OPN、小鼠OPN、豬OPN、牛OPN、雞OPN和兔OPNcDNA。近年來(lái),OPN作為一種新型的細(xì)胞因子,在早期細(xì)胞免疫應(yīng)答、肉芽腫炎癥、腫瘤發(fā)生及轉(zhuǎn)移中的作用倍受關(guān)注。（提示：以下敘述中均以O(shè)PN代替骨橋蛋白。）

小鼠骨橋素(OPN)elisa試劑盒操作注意事項(xiàng)

收集標(biāo)本前都必須有一個(gè)完整的計(jì)劃，必須清楚要檢測(cè)的成份是否足夠穩(wěn)定。我們提倡新鮮標(biāo)本盡早檢測(cè)，對(duì)收集后當(dāng)天就進(jìn)行檢測(cè)的標(biāo)本，及時(shí)儲(chǔ)存在4℃?zhèn)溆?，如有特殊原因需要周期收集?biāo)本，請(qǐng)?jiān)炷Ｈ〔暮?，將?biāo)本及時(shí)分裝后放在-20℃或-70℃條件下保存。因冰室與室溫存在一定溫差，蛋白極易降解，直接影響實(shí)驗(yàn)質(zhì)量，所以避免反復(fù)凍融。

1. 血清：室溫血液自然凝固10-20分鐘，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清，保存過(guò)程中如出現(xiàn)沉淀，應(yīng)再次離心。

2. 血漿：應(yīng)根據(jù)試劑盒的要求選擇 EDTA 、檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑，加入 10 ％（ v/v ）抗凝劑( 0.1M 檸檬酸鈉或 1% heparin 或 2.0%EDTA.Na2) 混合 10-20 分鐘后，離心 20 分鐘左右（ 2000-3000 轉(zhuǎn) / 分）。仔細(xì)收集上清。如有沉淀形 成，應(yīng)再次離心。

3. 尿液：用無(wú)菌管收集，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清，保存過(guò)程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。胸腹水、腦脊液參照實(shí)行。

4. 細(xì)胞培養(yǎng)上清：檢測(cè)分泌性的成份時(shí)，用無(wú)菌管收集。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)的成份時(shí)，用PBS（PH7.2-7.4）稀釋細(xì)胞懸液，細(xì)胞濃度達(dá)到100萬(wàn)/ml左右。通過(guò)反復(fù)凍融，以使細(xì)胞破壞并放出細(xì)胞內(nèi)成份。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。保存過(guò)程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。

5. 組織標(biāo)本：切割標(biāo)本后，稱取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆?。?biāo)本融化后仍然保持2-8℃的溫度。加入一定量的PBS（PH7.4），用手工或勻漿器將標(biāo)本勻漿充分。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。分裝后一份待檢測(cè)，其余冷凍備用。

6. 標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取，提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行，提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。若不能馬上進(jìn)行試驗(yàn)，可將標(biāo)本放于-20℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融.

7. 不能檢測(cè)含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過(guò)氧化物酶的（HRP）活性。

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